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凝胶迁移或电泳迁移(EMSA)原理

  • 价格面议
  • 所在地:重庆市九龙坡区
  • 供货总量:样本量
  • 更新时间:2015-01-28
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凝胶迁移或电泳迁移(EMSA)原理
        凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

主要仪器

高速组织捣碎机: SWISS KINEMATIC Ltd. Co(型号:PT1600E)

电泳仪:北京六一仪器厂(型号:DYY-8C)

电泳槽:北京六一仪器厂(型号:DYCZ-24D)

转印槽:北京六一仪器厂(型号:DYCZ-40D)

低温高速离心机:湖南湘仪公司(型号:H2050R)

超低温冰箱:美国FORMA公司(型号:702)

分光光度计:上海分析仪器总厂(型号:721)

脱色摇床:上海琪特分析仪器有限公司(型号:STS-2)

主要试剂

蛋白质预染分子量marker(118,90,48,36,27,20kd):Fermentas

NC膜:Millipore公司(型号:0.45um)

化学发光底物:PIERCE公司

电泳类生化试剂均为美国amresco公司产品

其他生化试剂为国药集团上海化学试剂公司产品

总蛋白测定试剂盒:南京建成生物工程研究所

NF-KB探针:由Invitrogen公司合成与标记

成像系统:富士FLA-5000全功能激光影像成像系统

EMSA实验步骤

1、探针的标记

2.探针的纯化

3.EMSA 胶的配制

4.EMSA结合反应

5.电泳分析

客户需知

方法:    

同位素P32标记探针/生物素/荧光素标记/进行检测。

技术要点: 

实验过程包括核蛋白的提取,同位素标记/生物素/荧光素标记/与纯化,凝胶电泳,胶片暴光等。在EMSA操作中会用到同位素,要注意实验室环境和实验员的保护。

客户提供:

细胞 25ML的细胞瓶培养的细胞。

组织 200mg-400mg

探针 自备探针。

收费标准

欢迎询价详谈

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