总RNA提取技术服务

实验介绍 

TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。总RNA提取（Trizol提取）实验步骤

在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase 的作用。

1. 提取组织RNA 时，每50～100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA 时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106 个细胞加1ml Trizol 后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；

2. 将上述组织或细胞的Trizol 裂解液转入EP 管中,在室温15~30C下放置5 分钟；

3. 在上述EP 管中，按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3 分钟后， 12000g（2℃～8℃）离心15 分钟；

4. 取上层水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10 分钟,12000g（2℃～8℃）离心10 分钟；

5. 弃上清， 按照每1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇进行洗涤， 涡旋混合， 7500g（2℃～8℃）离心5 分钟，弃上清；

6. 让沉淀的RNA 在室温下自然干燥；

7.用Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。

实验周期：

大约一周，根据量的多少而有所不同。

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