逆转录病毒构建，包装，纯化，鉴定

逆转录病毒包装
简介            
逆转录病毒（Retrovirus）是一类RNA病毒。在逆转录酶的作用下，以病毒RNA为模板合成cDNA，再通过DNA复制、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统，由逆转录病毒载体、辅助载体（表达病毒包装需要的蛋白质）和包装细胞系组成。逆转录病毒载体在外源基因表达、基因沉默、基因治疗、生物制药等得到广泛的应用。逆转录病毒载体主要优点：转染范围广，可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等；转入的外源基因可完全整合；对细胞感染率高；感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。

逆转录病毒载体系统共由两部分组成：包装细胞系和缺陷病毒本身。在逆转录病毒载体中，去除了正常的蛋白编码序列而保留了复制和包装信号，通过分子克隆技术将目的基因插入此载体上，而包装细胞系能提供病毒载体包装成病毒粒子所需的结构蛋白。当重组病毒载体导入包装细胞后，缺陷病毒载体和包装细胞的互补作用共同完成病毒装配，该病毒颗粒可感染其他宿主细胞，此时目的基因进入该细胞并整合到细胞基因组中，导致插入序列在宿主细胞中表达，产生目的蛋白。宿主细胞不能像包装细胞那样为缺失结构基因的逆转录病毒提供结构蛋白，因而在宿主细胞内不会产生新的感染性病毒颗粒，保证了该载体在生物制品领域的生物安全性问题。 

1  
服务优势:
1. 转染范围广，可以感染各种细胞类型，如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等；
2. 转入的外源基因可完全整合；
3．对细胞感染率高，达到100 %；
4．感染细胞不产生病变，可建立细胞系长期持续表达外源基因。
逆转录病毒载体的不足之处，如:
1．只能整合至分裂期细胞；
2．可插入外源基因片断小（<10kb），难以满足较大基因的插入；
3．病毒滴度是限制临床应用的主要方面；
4．有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能，随机整合可能产生不良作用。
 
服务内容：瞬时基因沉默；

2 稳定基因沉默。

服务流程：
1.含目的基因的逆转录病毒载体的构建和纯化提取；
2.逆转录病毒表达载体和辅助质粒共转染293T细胞；
3.大约在转染48 h后，收获逆转录病毒上清，轻轻地移出上清，用0.45μm的滤膜过滤，或在4℃以500g离心5min以除去活细胞；
4.如果在1～2 h内使用逆转录病毒上清，将其放置在冰上，若时间间隔较长时，置于干冰上冰冻，而后转到-70℃贮存；
5.融化冰冻的上清，在37℃下加温片刻，立即使用。
 
客户提供：
所要表达的外源基因名称或序列和所要选择的穿梭载体。
 
我们提供：
提供重组后的腺病毒载体质粒（4μg），并附上重组成功的酶切鉴定结果及对目的基因的PCR鉴定结果。

收费标准

欢迎询价详谈

更多实验技术服务请见中心网站，或来电询洽！

威斯腾生物----专业平台，专业服务！

【本平台合作项目】

慢病毒，腺病毒，RNAi类，分子生物学类，蛋白组学类，细胞生物学类，芯片类，病理类实验技

术服务，并可以为科研朋友提供课题设计指导，SCI协同服务。

【地址】重庆市沙坪坝三峡广场利得尔大厦A座8-7

【全国免费电话】400-675-6758

【实验预订电话】86-023-65316016，86-023-65316556

【网址】http://www.cqwestern.com

【邮箱】huameixinan@163.com


 威斯腾生物——您的慢病毒设计专家！实验预约热线：400－675－6758   13340212218 邮箱：huameixinan@163.com  QQ：68183761