荧光高通量抗体芯片

定量抗体芯片平台 

定量抗体芯片是RayBiotech的Quantibody®系列芯片，它是利用多个夹心ELISA法的原理同时进行定量检测的系统。它结合了ELISA法高特异性、高灵敏度和芯片高通量的优势。通过在玻璃片上固定多个特异性捕获抗体，一次实验可定量检测240多个蛋白，检测样品体积仅需50-100 μL。将梯度稀释的标准品和未知样品在一块玻片上一起处理。利用荧光素作为检测信号，通过比较未知样品和标准曲线的信号，来确定样品中的未知因子的浓度。定量芯片的结果具有一致性和可靠性，且节省时间和样品量。

定量抗体芯片试剂盒组成

1 l 定量芯片---Quantibody®Array Glass Chip

2 l 样品稀释---Sample Dilent

3 l 1500×荧光标记链霉亲和素­­---Cy3 equivalent dye-conjugated Strepavidin,1管

4 l 2X封闭缓冲液---（Blocking Buffer 10ml)

5 l 20X洗液I ---（20X Wash Buffer I，30 ml)

6 l 20X洗液II---（20X Wash Buffer II, 30 ml)

7 l 标准品---（standard mix， 1管）

8 l 检测抗体---(Dectection antibody cocktail)

9 l 玻片芯片配件--（玻片框架、垫圈、搭扣边、密封条）

10       30ml管---（tube）

11 l 操作手册

结果扫描 

12      荧光信号采用激光扫描仪进行扫描,除了常用的GenePix的激光扫描仪以外，有十几个品牌的不同型号都可使用RayBiotech的玻片式抗体芯片，仪器型号详见蛋白芯片技术小册子激光扫描仪推荐。玻片标准大小:25 mm x 75 mm

13 玻片厚度:1 mm

14 检测方向:芯片正面朝向光线和检测器

15 扫描区域:22 mm x 73 mm

16 对焦:自动对焦或可调(+/- 200 μm)

17 激发光线:Cy3 (绿光) 532 nm通道

18 分辨率:≤20 μm

19 动态范围:>103

20 检测图片输出:16-bit TIFF格式图片

数据分析 

     一条玻片芯片有16个孔，可选取6个或8个孔做标准曲线，剩下8个或10个孔用于样品检测。将标准品蛋白进行梯度稀释后加入孔中，然后加入检测抗体混合液，通过已知浓度的标准品蛋白作出各个检测指标的标准曲线。标准曲线可以选用直线方程，也可选用log-log方程。使用RayBiotech分析软件，只需通过仪器读取各点荧光值，将数值导入分析软件，便可以直接得出标准曲线，方便快捷。