菌种的驯化实验技术服务

实验原理：

驯化是通过人工措施使微生物逐步适应某一条件，而定向选育微生物的方法。通过驯化可取得具有较高耐受力及活动能力的菌株。驯化常用于废水处理中微生物的选育，以获得对某种污染物具有较高的降解能力的高效菌株。

仪器和试剂：

1． 无机盐含酚培养基4份，各含有苯酚0.5，1.0，1.5和2.0g，此外，各加入KH2PO40.5g，K2HPO4  0.5g，MgSO4·7H2O  0.2g，CaCl  0.1g，NaCl  0.2g，MnSO4·H2O痕量，FeCl2   10％ 溶液1滴，NH4NO2  1.0g，蒸馏水100mL，调pH为7.5，分装于250mL三角瓶中，每瓶装25mL，121℃（15磅）灭菌20min。                                 

2．试剂：4mol/L NH3·H2O溶液；2％4 -氨基安替比林溶液；20％吐温80溶液；76％铁氰化钾溶液

3．恒温振荡器。

4．移液管、试管、滴管等

实验步骤：

接  种

取受苯酚污染的土壤1g接入含苯酚浓度0.5g/L的培养基中（共接2瓶）。一瓶在28～30℃下振荡培养，另一瓶放4℃冰箱保存。

检  查

经24h培养后，将培养和冰箱保存的两瓶培养液取出，摇匀放置片刻，待泥沙沉降再按下列步骤进行检查。

1．  检查培养液混浊度：用肉眼比较，如瓶中液体混浊度高，说明已有菌体增殖。

2．  确定苯酚的消失：取少量培养基与未培养液分别过滤，各取0.5mL过滤加至二支小

试管中。再按顺序加入下列试剂：”A”液1滴，”B”液1滴，”C”液2滴，”D”液2滴，培养液中如含苯酚则呈红色，为阳性结果；如不含苯酚则呈微黄色，为阴性结果。表示培养液中的苯酚已被降解了。

一次传代

取经上述检查证实有降解酚菌生长的培养液2.5mL，接入含苯酚浓度为1g/L的培养液中，28～30℃振荡培养，接种后剩余的母液放冰箱（4℃）保存，以与下代培养作对比。

二次至多次传代

经检查证实有菌生长的一次传代培养接入含苯酚浓度更高的培养基中继续进行驯化培养。约至2g/L酚浓度时，可选得耐酚力和解酚力高的菌株。分  离

取上述（含酚浓度最高）培养液，进行划线分离（用含酚的平板培养基，划线方法与“基础实验”中讲到的相同）。所得纯的高效菌株可保存培养，供实验所用。结果与讨论

报告各次检查结果，比较各代培养液得菌体增殖情况和苯酚消失情况。观察分离所得到的微生物并绘图表示形态。

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