基因组文库（Genomic Library）构建
基因组文库（Genomic Library）构建
用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段，整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。基因文库＝基因组文库＋cDNA文库 。
载体的种类和特征：
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受体细胞 |
结构 |
插入片段 |
举例 |
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质粒 |
E.coli |
环状 |
很小，<8kb |
pUC18/19 ,T-载体, |
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λ噬菌体 |
E.coli |
线状 |
9-24kb |
EMBL，λgt系列 |
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丝状噬菌体及噬菌粒 |
E.coli |
环状 |
<10kb |
M13系列 |
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粘粒载体 |
E.coli |
环状 |
35-45kb |
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BAC |
E.coli |
环状 |
约300kb |
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PAC |
E.coli |
环状 |
100-800kb |
PCYPAC |
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YAC |
酵母细胞 |
线性染色体 |
100-2000kb |
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MAC |
哺乳动物细胞 |
环状 |
>1000kb |
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病毒载体 |
动物细胞 |
环状 |
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SV40 载体，昆虫杆状病毒载体 |
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穿梭载体 |
动物细胞和细菌 |
环状 |
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pSVK3质粒，PBV,Ti质粒， |
基因组文库构建步骤：1、载体：
l噬菌体：48.5kb,插入型(最多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb，最适19-20kb)， EMBL, Charon 粘性质粒(Cosmid)：4-6kb, 质粒+噬菌体的性质，可容纳大片段的外源基因，最多可容纳46kb。 酵母人工染色体克隆体系（YAC，Yeast Artificial Chromosome Cloning System） 插入大小200—1000kb 2、 载体DNA的制备： 高分子量的外源DNA 100-150kb载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理 （常用BamHI） （蔗糖密度梯度离心） （碱性磷酸酶） 3、连接和包装：外源片段与两臂之间的比例，包装蛋白 4、感染宿主菌：选择合适的宿主菌，LE392, NM538, NM539, KW251等 5、基因组文库的保存和扩增： 6、测滴度，要在106fu以上
7、保存：氯仿4℃，7% DMSO -70℃
您需要提供：
动物的血或细胞、新鲜植物叶片、活体昆虫或纯化好的DNA样品。
我们提供：
1、文库（10%甘油菌）以及菌落效价（CFU/ml）；
2、随机抽样测序结果。
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