cDNA文库构建

简介：

以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同，所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。

cDNA文库的构建：基因文库的构建是现代生命科学研究中的一项重要技术。自70年代初首例cDNA克隆问世以来，已用构建和筛选cDNA文库的方法克隆了很多基因。通过构建cDNA文库能直接分离到生命活动过程中的一些调控基因及了解这些基因所编码的蛋白质的相互作用关系．因此cDNA文库的构建是基因克隆的重要方法之一，从cDNA文库中可以筛选到所需的目的基因，并直接用于该目的基因的表达。它是发现新基因和研究基因功能的工具。
构建cDNA文库的基本步骤构建cDNA文库的基本步骤有五步：

①      制备mRNA；

②      合成cDNA；

③      制备载体DNA；

④      双链cDN的分子克隆；

⑤对构建的cDNA文库进行鉴定，测定文库包含的克隆数，抽查克隆的质量和异质性，如果需要可适当扩增。对cDNA的文库的要求：一是希望文库能包括各种稀有mRNA的cDNA克隆；二是克隆的cDNA应是全长的，避免丢掉5’端的序列。

SMART技术：

SMART技术的出现是一个新的里程碑，这个称作 Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript(SMART)，能使我们扩增得到的cDNA就是全长cDNA；同时结合本公司文库均一化技术和消减文库技术，特提供如下文库构建服务： 

服务项目：

1．普通cDNA文库             2．SMART cDNA文库              3．均一化（Normalized） cDNA文库   

 4．SMART 均一化cDNA文库    5．SMART cDNA消减文库

SMART cDNA文库特点：

1. 只需要少至25ng的mRNA或50ng的总RNA。 

2. 采用Clontech SMART专利技术，全长比率高。

3. 实验周期短，最快2～3周即可完成整个文库构建

cDNA文库质量指标：1．文库容量达到10的6次方
                   2．重组率质粒文库≥90%
                   3．插入片断平均为1kb以上
                   4．cDNA的读框完整≥30%

 SMART cDNA文库应用：1．物种种质资源开发与保护
                      2．物种遗传功能分析
                      3．基因克隆与表达
                      4．新基因发现
                      5．功能基因的筛选 

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