大鼠原位肝移植手术

(rat orthotopic liver transplantation，ROLT)

 1 材料和方法

　　1.1 实验动物及材料 健康雄性SD大鼠共260只，体质量200～250 g，受体体质量略重于供体。供体术前禁食4 h，自由饮水。受体手术前12 h禁食，自由饮用糖盐水。SD大鼠均由苏州大学动物实验中心提供。显微手术器械一套，双极电凝来自上海沪通GD350-S3。自制器械：门静脉袖套管，内径为1.70 mm，外径为1.94 mm，长3.0 mm;肝下下腔静脉袖套管，内径为2.50 mm，外径为2.75 mm，长3.0 mm;胆总管袖套管，为小儿硬膜外导管长4.0 mm。麻醉药品：氯胺酮(100 mg/2 mL)。供体肝脏灌注液：4 ℃乳酸钠林格氏液500 mL中加入肝素钠12 500 IU制成。供体肝脏保存液：4 ℃乳酸钠林格氏液。受体肝脏驱血液：贺斯。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 供体手术。供体采用氯胺酮麻醉，100 mg/kg，腹腔注射。取腹部肋缘下弧型切口，进腹后，将肠管推向左下腹，生理盐水纱布裹覆。游离肝下下腔静脉直至左肾静脉开口水平，分别电凝切断腰静脉、右肾上腺静脉。游离右侧肾动脉、右肾静脉。分离胆总管，在肝管汇合部远端约5.0 mm处剪开胆总管前壁，向近端插入胆总管插管，1号丝线结扎固定。于插管处远端剪断胆总管。游离门静脉，分离开肝固有动脉与门静脉之间的组织。分离幽门静脉，贴近门静脉处用6-0 prolene线结扎幽门静脉，线结尽可能留短。游离部分腹主动脉，用小儿细静脉留置针穿刺，1号线固定。迅速剪开膈肌，血管钳阻断胸主动脉。4 ℃供体肝脏灌注液持续灌注肝脏，流速控制在2～3 mL/min。经胸腔剪开肝上下腔静脉，平右肾静脉开口下缘剪断肝下下腔静脉，灌注液顺利流出。分离切断肝周韧带。推肝脏向下使膈肌与肝脏之间的下腔静脉壁形成轻微的张力，贴膈肌环剪断下腔静脉。电灼离断肝与食管的血管支。均匀灌注肝脏至完全苍白，约需2～3 min，电凝后切断肝动脉，在脾静脉的水平剪断门静脉，在线结的远侧剪断幽门静脉，取出供肝。置入0～4℃乳酸钠林格氏液中。

　　1.2.2 修肝。修剪掉肝上下腔静脉壁上的毛刺，保留肝上下腔静脉前壁2 mm、后壁1 mm。仔细剥离门静脉壁上的脂肪组织。用微血管镊穿过自制袖套管管腔，夹住门静脉远端壁后，袖套管滑下，门静脉远端壁外翻于套管壁外，以幽门静脉的结扎线结刚好外翻于套管壁外为佳，6-0 prolene线在袖套管烙痕内结扎固定门静脉外翻壁。同法处理肝下下腔静脉。在肝上下腔静脉两角用6-0 prolene带针线各缝合一针备作为两点式缝合的支持线。

　　1.2.3 受体手术。采用氯胺酮腹腔注射麻醉，80 mg/kg。肋缘下弧型切口，将肠管推向左下方，生理盐水纱布裹覆。在右肾静脉上缘平面游离肝下下腔静脉，电凝切断腰静脉、右肾上腺静脉。游离肝周韧带，电凝切断左膈静脉，充分游离肝上下腔静脉。电凝切断左肝至食管血管。游离胆总管，在分叉处切断，将远端胆总管翻向下方。游离结扎切断肝固有动脉。在幽门静脉水平上方游离门静脉。用微血管夹阻断肝下下腔静脉、门静脉，门静脉夹尽量远离肝脏，无肝期计时。在门静脉分叉处穿刺，缓慢注入(1.0～1.5 min)37 ℃驱血液2.5～3.5 mL。用Satinsky钳钳夹膈肌环阻断肝上下腔静脉，以膈肌环刚好外露在钳下缘为好。近肝切断肝上下腔静脉、门静脉和肝下下腔静脉，移去原肝。将供肝从4 ℃的保存液中取出，原位放入肝脏腔隙内。将供肝右角6-0 prolene线与受者肝上下腔静脉右侧角腔外缝合，打结并牵引。将供肝左角6-0 prolene线与受者肝上下腔静脉左侧角腔外缝合，打结，单线牵引。自左向右连续缝合腔静脉后壁，“U”字缝合右角后再作腔静脉前壁连续缝合至左侧角。肝素化生理盐水冲洗血管腔排出气泡，缝合线与右角的牵引单线打结，肝上下腔静脉缝合完成。冲洗受者门静脉断口内的血凝块，迅速套入供者门静脉袖套管，在袖套管烙痕内用1号丝线结扎。移去门静脉微血管夹及肝上下腔静脉Satinsky钳，供肝恢复血流，结束无肝期。供肝肝下下腔静脉见血后，微血管夹夹闭供肝肝下下腔静脉。将受者肝下下腔静脉微血管夹下移至右肾静脉处，肝素生理盐水冲洗掉血凝块，迅速插入供肝下腔静脉袖套管，1号丝线烙痕内结扎固定。大量40 ℃复温液冲洗供肝和腹腔复温。将胆总管支架管插入受者胆总管内，1号丝线结扎固定，大网膜覆盖供肝胆总管，固定。拭尽腹腔内40 ℃复温液。滴两滴庆大霉素于腹腔内及皮下。用1号丝线关腹。

　　1.2.4 术后处理。手术结束后，酌情从阴茎背静脉补液2～3 mL。将大鼠放置在电热台板上复温30 min并持续吸氧。完全清醒后单笼喂养，自由进糖盐水，自由进食。

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