Cas9制备基因敲除细胞系

百奥赛图在ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9技术的基础上，开发和优化出一套高效的基因敲除／基因敲进系统（Biocytogen Extreme Genome Editing System，简称EGE技术）。

EGE技术（基于CRISPR技术）制备细胞系敲除优势

EGE技术比普通的CRISPR/Cas9技术介导的同源重组效率提高了10~20倍，从而使得基因改造更加快速和方便。利用EGE技术，几乎可以在基因组中的任意位点，对DNA序列进行各种精确地编辑，实现细胞系的基因敲除、基因敲进、及多位点同时敲进。从而方便在细胞系对目的基因进行研究，或是研究目标蛋白间的相互作用。与传统的RNAi介导的knockdown相比，得到的基因改造细胞系表型更稳定，结果更可靠。

EGE技术（基于CRISPR技术）应用案例

利用EGE技术，百奥赛图制备了在ACTB（细胞骨架丝状蛋白）基因编码框翻译起始位点敲进EGFP（融合蛋白）的U2OS细胞系，以及在LMNB1（核蛋白）基因编码框起始位点敲进EGFP（融合蛋白）的大鼠C6细胞系。

1、打靶载体设计

i:ACTB基因编码β-actin蛋白，它是一种细胞骨架蛋白。打靶载体同源臂约为1Kb，分别利用Crispr/Cas9和EGE系统介导打靶载体的同源重组ii:LMNB1基因编码核蛋白Lamin-B1。打靶载体同源臂约为1Kb，分别利用Crispr/Cas9和EGE系统介导同源重组

2、荧光检测结果

3、流式分析结果

①:利用流式细胞术分析重组效率发现，在U2OS细胞系中，CRISPR/Cas9介导的EGFP-ACTB基因敲进效率只有1.91%，而EGE系统可以达到15.02%，提高了约8倍;

②:在C6细胞系，EGE系统将EGFP-LMNB1的敲进效率从0.19%升至3.6%，提高了约19倍。

品牌优势

百奥赛图是国际基因敲除/敲入模式动物开发最具实力公司之一。

百奥赛图成立于2009年，是国内最早一批对外提供基因打靶模式动物制备服务的生物技术公司，经验丰富，目前，已开发基因敲除/敲入小鼠近600种，基因敲除/敲入大鼠50余种，基因敲除/敲入细胞系40余种。服务群体不仅包括以哈佛大学、NIH、 东京大学、牛津大学、北京大学、清华大学、中科院动物所、中科院神经所等为代表的国内外科研学术机构，也包括以协和医院、北大医院等为代表的科研实力强大的综合性医院，更包括以强生、罗氏、GSK、默克等为代表的国际顶尖医药企业，品牌知名度及美誉度极佳。