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人胚胎干细胞诱导、打靶、分化

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  • 更新时间:2015-04-13
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人多能干细胞诱导、打靶、分化

百奥赛图人多能干细胞技术平台已成功建立了人多能干细胞(包括人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞)的培养体系。在此基础上,开展了基因打靶及诱导多能性干细胞制备的研发工作,目前已完成多个自主及国内外客户的基因敲进/敲除课题,并从人成纤维细胞制备了多株诱导多能性干细胞系。

一、人胚胎干细胞基因打靶

结合公司自主研发的EGE系统,利用CRISPR/Cas9系统介导的打靶载体的同源重组,已制备了多种基因敲进/敲除的人胚胎干细胞系,包括;

1.ACTB-GFP: 在编码人细胞骨架蛋白ACTB的ACTB基因编码框翻译起始位点敲进GFP(融合蛋白);

2.OCT4-GFP: 在编码人细胞多能性标志OCT4的OCT4基因编码框翻译终止密码子前敲进GFP (融合蛋白);

3.TH-GFP: 在编码人多巴胺神经元标志酪氨酸羟化酶的TH基因编码框翻译终止密码子前敲进GFP (融合蛋白);

百奥赛图的优势:

1. 经验丰富:技术团队具有多年科研及基因打靶经验,可与客户进行有效沟通,并提出相关建议,最大程度确保课题的成功;

2. 高效率:目前人胚胎干细胞系基因打靶成功案例中敲入的最大片段为8kb,敲除的最大片段为3.5kb;课题成功率约为90%;

3. 时间短:平均课题完成时间为3-4个月。

 

二、诱导多能性干细胞制备
 

利用非整合型质粒重编程方法,从人包皮成纤维细胞制备了多株诱导多能性干细胞系,这些诱导多能性干细胞系表达多能性标志OCT4,SSEA4及TRA-1-60,具有正常核型并可在免疫缺陷小鼠体内形成畸胎瘤。从成人皮肤成纤维细胞制备的诱导多能性干细胞系正在鉴定中。


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一、 一次运输: 1. 正常情况下,我司安排运输不少于2只(包括2只)活体模式动物,若客户要求增加运输数量(数量足够情况下),我公司只留下1-2只活体作为备份,不再做二次运输; 2. 活体动物完成运输1个月后,客户经理联系客户确认动物保种情况,若客户保种成功,我们即处死备份活体动物; 3. 活体动物完成运输1个月后,若客户要求继续保种或未做回复者,即日起开始计算代养费用。 二、 二次运输: 1. 若一次运输客户顺利拿到不少于2只(包括2只)活体动物时,客户要求二次运输者,所产生费用由客户承担,同时我司将剩余活体全部运输,不做活体备份;如需我司继续保留活体备份,即日起开始计算代养费用。 2. 若一次运输客户拿到少于2只活体动物时,客户要求二次运输者,所产生费用由我司承担。

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