武汉云克隆诊断试剂研究所

整体试验服务--动物疾病模型构建--小鼠肺栓塞模型

肺血栓栓塞症(PTE)是内源性或外源性血栓栓子堵塞肺动脉所引起肺循环障碍的临床和病理生理综合征，是一种相对常见的心血管急重症，其因栓子堵塞肺动脉血管床从而引起危及生命的右心衰竭。其发病率在心血管疾病中仅次于冠心病和高血压，未经及时治疗的肺栓塞死亡率高达20%~30%，由于对该病的认识不足，加上其临床表现缺乏特异性，误漏诊率高达70%~90。该病发病率高，预后严重，是肺部疾患中最常见的死亡原因.

    1.实验动物

    SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为22g~26g。

2. 实验分组：

实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组，每组15只。

3.主要试剂

凝血酶

    4.建模方法

4.1选取体重22g-26g的小鼠，以3%戊巴比妥钠，以80mg/kg剂量腹腔麻醉小鼠，小鼠取仰卧位，将四肢和头部用胶布固定在解剖板上，用8%硫化钠对颈部脱毛，活力碘消毒后准备手术。

4.2颈部正中切口，逐步分离软组织和肌肉，暴露左侧颈静脉，向颈内静脉注射

凝血酶溶液（溶于0.9%生理盐水，剂量20U/kg）。

4.3清理术野，缝合颈部切口，待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。

4.4假手术除仅向颈静脉注射生理盐水以外，其他操作均相同。

4.5 在模型建立后24h，分别处死小鼠，取左侧部分肺组织于4%多聚甲醛溶液固定，石蜡包埋；其余肺组织-80度保存。

5.模型的评价

5.1外周血血小板计数

取小鼠外周血20μl,置于盛有380μl (10g/L)草酸氨稀释液的无菌EP管中,混匀后用血球记数板行血小板计数。

5.2组织病理评价

取左肺4%多聚甲醛固定，然后将肺组织常规脱水，石蜡包埋，切片（厚度为5μm），HE染色。术后几小时即可见肺泡里大量渗出并有出血，肺泡间隔增厚，其内大量炎性细胞浸润，可见较大的动脉栓塞，血小板和红细胞聚集粘附在栓子周围。

5.3统计学处理

　应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（`x ±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著性差异。

图1 肺组织HE染色图，模型组肺泡内可见大量渗出并有出血，肺泡内间隔增厚，其内大量炎性细胞浸润，可见较大的血管栓塞