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整体试验服务--动物疾病模型构建--CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型

  • 价格:700元/只
  • 所在地:湖北省武汉市
  • 供货总量:120只
  • 更新时间:2017-03-10
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武汉云克隆诊断试剂研究所

整体试验服务--动物疾病模型构建--CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型

 

肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质(特别是胶原)过度沉积,不是一个独立的疾病,是许多慢性肝病共同的病理过程,几乎各种慢性肝病(化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性,以及胆汁淤积性)都可以导致肝纤维化。

CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。在肝细胞内质网中,经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后,CCl4产生了自由CCl3·Cl,它们与肝细胞内大分子发生共价结合, 可攻击膜不饱和脂质,引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化,损伤肝细胞,从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化,释放出型胶原酶,降解型胶原。同时该细胞由合成分泌型胶原改为合成分泌I 型胶原,取代了型胶原,促使肝脏纤维化

 1.实验动物

 SPF级BablC小鼠健康,雄性,体重为18g-20g

    2.实验分组

实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。

3.实验周期

6W

4.主要试剂

CCl4(上海国药集团)

5.建模方法

    按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液(CCl4:橄榄油=1:4), 每3天1次,连续6W。对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。正常饮食饲养,观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。

完成持续给药6W后,称体重,戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠,摘眼球取血室温静置2h后于4 3000r离心10分钟提取血清,放入-80 冰箱冻存。同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm10%中性福尔马林中固定,石蜡包埋;其余组织液氮冷冻-80 保存

6.模型评价

1.大体观察: CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽;大体标本显示,CCl4组肝脏与周围组织粘连明显,肝边缘圆顿,肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。

2.肝脏指数变化:取肝脏,称质量,计算肝脏指数=肝脏重/体重, CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。

3.肝功能指标:

检测小鼠血清中肝功能指标:丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBL)、白蛋白ALB)。结果发现 CCl4组小鼠血清中ALTASTTBL的含量显著高于对照组,ALB的含量显著低于对照组。

4.肝脏病理变化

取肝左叶,体积分数为10%福尔马林固定,石蜡包埋切片,HE及 Masson 染色后在电镜下观察肝脏炎症及肝纤维化程度按下述标准评判肝纤维化程度:

肝炎病变依炎症活动度分为 4 级: “−”汇管区周围及肝小叶内无炎症; “+”肝细胞变性范围不超过肝小叶半径的1/2,汇管区有炎症,小叶内少数肝细胞变性或呈点状坏死; “++” 肝细胞变性范围超过肝小叶半径 1/2,汇管区大量炎症细胞浸润,较多肝细胞变性,呈碎片状坏死; “+++”肝细胞变性范围超过肝小叶半径的 2/3,汇管区周围重度碎屑坏死,肝细胞以碎片状和桥接状坏死为主。肝纤维化按情况严重程度分为以下 4 级: “−”无肝纤维化现象; “+”汇管区胶原纤维增多,但无纤维间隔形成; “++”汇管区周围形成彼此不连接的不完全性纤维间隔; “+++”小叶结构紊乱,纤维间隔明显,分割肝实质。

  1. 细胞因子的变化:

肝脏损伤后,血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高,可以用ELISA 法检测

 

图1 肝脏大体图 大体标本显示,Oil组肝脏正常, CCl4组肝边缘圆顿,质地硬,肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节

 

1  2组小鼠肝脏指数的比较n=7 `x ±s)

 

组别

对照组

模型组

肝脏/体重比

0.073±0.008

0.046±0.004*

注:与对照组相比,*P<0.05

 

 

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