武汉云克隆诊断试剂研究所

整体试验服务--动物疾病模型构建--小鼠乙酸诱导肠炎模型

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种慢性非特异性炎症，其原因不明，是非特异性肠道炎症，其病变部位好发于直肠和结肠，多表现为腹泻、腹痛、黏液脓血便、 里急后重，具有易反复、病程迁延、不易治愈的特点。可能与细菌感染、食物或异物损伤、长期饲喂精饲料、滥用抗生素类药物及精神障碍等有一定的关系。在我国，UC的发病率有逐年增高的趋势，逐渐引起了人们的重视。到目前为止溃疡性结肠炎的病因及发病机制尚未完全明确，研究表明肠黏膜出现慢性炎症可能与基因、环境、微生物及免疫功能的失调等多种因素相互作用有关。

    1.实验动物

SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。

2. 实验分组：

    实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3. 实验周期

    7d

    4.建模方法

1. 小鼠术前12 h禁食，自由饮水。

2.  3%戊巴比妥钠进行腹腔麻醉(40mg／kg)小鼠，小鼠取头低尾高体位，将聚乙烯导管经肛门缓慢插入结肠3cm并经其注入5％乙酸0．4 mL，捏紧小鼠肛门倒提30 s后，注入生理盐水lmL冲洗，正常组注入等量生理盐水对照，造模结束后让小鼠平躺，自然清醒，常规饲养。

3. 7d后摘眼球取血，静止30min，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。 处死小鼠，取出肛门至盲肠末端的整个结肠和直肠段，预冷生理盐水冲洗干净，滤纸吸干，肉眼观察各组小鼠结肠的大体改变，测量结肠长度及记录湿重。剪取病变最严重的结肠1 cm，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色。观察病理改变，其余结肠置于～80℃冰箱备用。

  5.模型评价

1. 疾病活动指数(DAI)评分：

造模后观察小鼠每日腹泻、血便及体重变化情况，并记录小鼠的一般情况。造模后，模型组小鼠体重明显下降，出现身体蜷缩，毛发竖立，行动迟缓，食欲减退，大便稀溏的症状。DAI评分：造模后7d，综合小鼠体重下降百分率（体重不变为0，1～5为1分，6～10为2分，11～15为3分，大于15为4分），大便黏稠度（正常为0，松散大便为2分，腹泻为4分)和大便出血(正常0分，隐血阳性为2分，显性出血为4分）进行积分。

2. 模型组结肠明显短缩，质量指数计算公式为：

肠质量指数=结肠长度（cm）/结肠湿重（g）*100%

3. 组织学损伤评分

取病变最明显处结肠段1 cm，4％多聚甲醛溶液固定，然后将组织常规脱水，石蜡包埋，切片（厚度为4μm），HE染色。经HE染色观察，模型组病变结肠水肿，肠壁明显增厚。黏膜面有弥漫性出血点、红斑和溃疡。镜下可见结肠黏膜糜烂、溃疡、隐窝脓肿、杯状细胞消失，固有层有中性粒细胞、淋巴细胞浸润。正常组小鼠结肠黏膜完整，绒毛排列整齐，未见坏死、脱落。

4. 细胞因子检测

有大量的研究证实溃疡性结肠炎结肠黏膜中自由基水平显著升高，抗氧化机制缺失，大量的自由基对自身组织产生攻击作用，充当或激活炎症介质，使结肠炎症损伤不断放大。可使用用ELISA试剂盒检测血清中MPO、NO、TNF-α、iNOS、ICAM1等细胞因子的含量。

图1 结肠大体图 模型组结肠的长度短于正常组，结肠缩短变宽、水肿增厚、充血出血及溃疡

图2模型组大肠 HE染色图 镜下可见结肠黏膜糜烂、溃疡、出血，肠壁增厚、粘膜水肿，可见大量的淋巴细胞，大量淋巴滤泡形成