武汉云克隆诊断试剂研究所

整体试验服务--动物疾病模型构建--大鼠颅脑损伤模型

创伤性脑损伤（traumatic brain injury, TBI）是全球范围内主要的致死致残因素之一，通过一系列神经化学分子和信号的改变引起神经功能的紊乱，从而导致患者在行为、认知和记忆方面的损害。尽管对于 TBI 的研究投入了大量的人力财力，但由于其复杂的病理生理学机制，至今没有有效的治疗方案，如何提高这部分病人的生存率对我们的临床工作有重要意义。

1.实验动物

 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g

    2.实验分组

    实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.实验周期

7d

4. 建模方法

1. 称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，头部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。

2. 沿头部正中稍偏右切开头皮约2cm，钝性分离软组织及骨外膜后暴露颅骨，在人字缝前方2 mm，颅骨中线旁2 mm，开直径为4 mm的圆形骨窗，保持硬脑膜完好无损，采用自由落体撞击至脑挫伤的方法。

3. 用一个40g的金属重物自25cm高处垂直坠落，撞击置在硬脑膜上的圆柱体，致伤冲击力为 1000g·cm造成右顶叶脑挫裂伤，致伤面积为4mm×4mm，致中度脑损伤，然后用骨蜡封闭骨窗，缝合头皮。

4. 待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。

5. 对照组仅作右顶叶相应部位颅骨开窗，不致伤。

    5.标本的采集

1. 血液标本留取：分别于术后24h、72h及7d水合氯醛麻醉大鼠后,于下腔静脉取血2ml，室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。
2. 脑组织标本留取：取脑后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脱水后，经OCT包埋做冰冻切片，切片10um。

6.模型的评价

1.认知能力的检测

颅脑损伤后大鼠的神经功能受到损伤，认知能力也会受到影响。术后应用Morris水迷宫对各组大鼠进行为期6天的训练后开始实验，以排除对环境不适应造成的应激影响,剔除不健康的大鼠。

2.细胞凋亡检测

TBI 会产生大量的细胞凋亡。凋亡是发生在多细胞有机体中的一种程序性的细胞死亡过程，其中多种生化过程会引起细胞特征性的改变，特别是形态学上的改变，最后导致细胞死亡。用TUNEL法检测细胞凋亡。

图1 颅脑损伤手术操作图