武汉云克隆诊断试剂研究所

整体试验服务--动物疾病模型构建--大鼠盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型

脓毒症(sepsis)是指由感染引起的全身炎症反应综合征(Systemic inflammatoy response syndrome，SIRS)，临床上证实有致病菌侵袭存在或有高度可疑的感染性病灶，临床中多以常见并发症出现在重度感染、大面积烧伤、严重创伤或大手术术后的危重患者当中。脓毒症一旦发生，进展迅速，短时间可由全身炎性反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome，SIRS)、脓毒症进展为重度脓毒症(severe sepsis)(合并器官功能不全)、脓毒症休克(septic shock)(并发充分液体复苏亦无法纠正的低血压)及多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，以上三者可贯序发生，亦可同时发生，严重危及患者生命，产生极高的致死风险。虽然目前已经有许多动物模型用来复制脓毒症，但盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症的啮齿动物模型仍然是目前应用最广泛的脓毒症动物模型。

1.实验动物

 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g

    2.实验分组

    实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.实验周期

2d

4. 建模方法

1 称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（350mg/kg）麻醉，腹部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。

2 沿腹白线切开腹腔约2cm，找出盲肠，用 5-0 缝线结扎约1/3盲肠，以21G针头贯通穿刺结扎的盲肠2次。轻轻挤压使少量肠内容物从穿刺孔溢出确保通畅；将处理好的盲肠回纳入腹腔，用 5-0 缝线缝合内层，3-0缝线缝合外层，将大鼠置于加热垫维持肛温在37±0.5℃。

3 待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。

4 2d后大鼠水合氯醛钠麻醉后，于腹主动脉取血5ml，室温静止2h， 4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。处死大鼠，取出心脏、肝脏、肾脏、肺、小肠，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色，观察病理改变，其余组织置于-80℃冰箱备用。

 5模型的评价

1.一般情况观察

脓毒症组术后苏醒延迟，醒后精神萎靡，身体蜷缩，基本不活动，进食进水减少，对外界反应迟钝，呼吸频率加快，被毛蓬松少光泽，大便稀软，不再扎堆取暖。12h出现死亡大鼠，随着时间的延长大部分大鼠出现皮温低，肌力减弱，眼周血性分泌物，停止进食进水，排泄稀水样便，色黄，腥臭味。进一步发展出现呼吸急促，对被动仰卧无反抗，排泄物呈黏液状，量多，最终死亡。剖腹可见恶臭味血性渗液，肠管水肿黏连，盲肠坏死变黑。

2.组织病理学变化

心脏：光镜下结果比较，对照组大鼠心肌肌纤维结构排列紧密、 无水肿、充血及渗出。 模型组心肌肌纤维结构排列疏松，带状空泡化，细胞核肿胀，间质水肿、充血。

肝脏肝有大量空泡脂肪样变性，肝细胞肿胀并有炎性细胞浸润。

肺：模型组肺间隔增厚，部分肺泡组织结构被破坏，炎症细胞浸润。

肾：可见肾皮质及间质水肿伴大量炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞均有肿胀。空泡变性，坏死脱落，。肾小管囊腔扩张、管型形成。皮髓质境界欠清晰，肾小球收缩、毛细血管微血栓形成

小肠：模型组小肠粘膜水肿、白细胞浸润、出血和上皮细胞坏死脱落。

3.细胞因子的变化：

血浆中炎症因子增加是脓毒症的典型特征之一,IL－1β、TNF－α及IL－6 是主要的促炎症细胞因子，在脓毒症模型后显著升高。

图1 术后24h死亡的大鼠盲肠解剖图，结扎段盲肠发黑坏死明显。