武汉云克隆诊断试剂研究所

整体试验服务--动物疾病模型构建--大鼠脊髓损伤模型

脊髓损伤(spinal cord injury ，SCI)是交通、工矿事故及运动意外中常见的中枢神经系统损伤性疾病，损伤所致的截瘫严重影响伤者的身心健康。脊髓损伤后可以触发一系列继发性病理生理级联反应，从而进一步加重脊髓组织损伤的程度。目前脊髓损伤模型繁多，但尚无统一的分型。

1.实验动物

 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g

    2.实验分组

    实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.实验周期

    4W

4. 建模方法

1. 取正常大鼠用水合氯醛作腹腔麻醉(350mg/kg)，将大鼠俯卧，固定于大鼠固定板上，在背部脊髓两侧触摸大鼠最下肋与软组织分界处(浮肋与第 13胸椎连接处)作为骨性定位标志，向上、下 5 cm 范围备皮、脱毛后常规消毒，铺无菌手术单，在后正中线做纵行切口，大约 3cm ，依次切开皮肤、皮下筋膜，暴露椎旁肌，约平对第 10 胸椎棘突，钝性剥离肌肉暴露棘突、椎板和横突。参考定位：T9棘突倾向尾侧，T10 棘突中立位，T11 棘突倾向头侧。
2. 确定 T10胸椎位置，用骨剪在 T9 与 T10、T10与T11 棘突及相应椎板之间分别做两个横行剪口，再在 T10 胸椎两侧，横突与椎板连接处做纵行剪口，形成一个方形剪口界线，然后用咬骨钳咬住 T10 胸椎棘突用力拉起即“揭盖”，去除 T10 椎板，形成方形骨窗，修整骨窗边缘，充分暴露 T10对应的脊髓。

3. 用Allen' s 撞击器制备脊髓损伤动物模型，打击时，用拉钩拉开脊髓两侧软组织，牵拉固定，使脊柱稳定，不受呼吸运动影响，使 20 g 重量的击打棍从 3 cm 高度自由落体，致伤能量 60 g·cm，撞击T10 骨窗对应的脊髓，造成急性脊髓损伤，击打脊髓后，击打棍不动，停留 3 min 再移开。

4. 撞击成功标准为：撞击脊髓组织水肿、出血，硬脊膜完整呈紫红色，紧张，膨隆，大鼠尾巴出现痉挛性摆动，双下肢躯体回缩样扑动，呈迟缓性瘫痪。常规分层缝合后回笼饲养。

5. 术后4W，水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后，将大鼠固定于固定板上，生理盐水、4%多聚甲醛常规灌固定，暴露脊髓 T8～ T12，迅速取出脊髓组织，4%多聚甲醛后固定 4 h，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色，观察病理改变。

 5模型的评价

1.  术后一般情况观察 ：各损伤组大鼠的术后基本情况基本一致，打击后大鼠均表现为身体痉挛性颤动，尾巴痉挛性摆动，双下肢及躯体回缩样扑动。麻醉苏醒后大鼠双下肢呈弛缓性瘫痪，可出现尿潴留或尿失禁。解剖可见伤后大鼠硬脊膜内充血或水肿。
2.  组织病理学变化

HE 染色可以观察到假手术组灰、白质组织结构基本完整,神经细胞在灰质中分布均匀、胞体饱满、形态正常、细胞膜完整,白质内神经纤维排列整齐, 细胞间质均匀。SCI 组可见灰、白质组织结构不完整，损伤区灰质可见大片出血、大片坏死灶 、细胞肿胀、有的出现囊腔，白质内神经纤维排列不规则。

图1 暴露的脊髓