武汉云克隆诊断试剂研究所

整体试验服务--动物疾病模型构建--大鼠乙酸诱导肠炎模型

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种慢性非特异性炎症，其原因不明，是非特异性肠道炎症，其病变部位好发于直肠和结肠，多表现为腹泻、腹痛、黏液脓血便、 里急后重，具有易反复、病程迁延、不易治愈的特点。可能与细菌感染、食物或异物损伤、长期饲喂精饲料、滥用抗生素类药物及精神障碍等有一定的关系。在我国，UC的发病率有逐年增高的趋势，逐渐引起了人们的重视。到目前为止溃疡性结肠炎的病因及发病机制尚未完全明确，研究表明肠黏膜出现慢性炎症可能与基因、环境、微生物及免疫功能的失调等多种因素相互作用有关。

    1.实验动物

SPF级SD大鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为180g~220g。

2. 实验分组：

    实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3. 实验周期

    7d

    4.建模方法

1. 大鼠术前12 h禁食，自由饮水。

2.  3%戊巴比妥钠进行腹腔麻醉(20mg／kg)大鼠，大鼠取头低尾高体位，将聚乙烯导管经肛门缓慢插入结肠8cm并经其注入10％乙酸1 mL，捏紧大鼠肛门倒提30 s后，注入生理盐水3mL冲洗2次，正常组注入等量生理盐水对照，造模结束后让大鼠平躺，自然清醒，常规饲养。

3. 7d后大鼠3%戊巴比妥钠麻醉后，于下腔静脉取血1ml，室温静止2h， 4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。 处死大鼠，取出肛门至盲肠末端的整个结肠和直肠段，沿肠系膜纵轴剪开，预冷生理盐水冲洗干净，滤纸吸干，肉眼观察各组大鼠结肠的大体改变，测量结肠长度及记录湿重。剪取病变最严重的结肠1 cm，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色。观察病理改变，其余结肠置于-80℃冰箱备用。

  5.模型评价

1. 疾病活动指数(DAI)评分：

造模后观察大鼠每日腹泻、血便及体重变化情况，并记录大鼠的一般情况。造模后，模型组大鼠体重明显下降，出现身体蜷缩，毛发竖立，行动迟缓，食欲减退，大便稀溏的症状。DAI评分：造模后7d，综合大鼠体重下降百分率（体重不变为0，1～5为1分，6～10为2分，11～15为3分，大于15为4分），大便黏稠度（正常为0，松散大便为2分，腹泻为4分)和大便出血(正常0分，隐血阳性为2分，显性出血为4分）进行积分。DAI综合评分介于0～4分之间，0分代表正常，4分代表炎症最大活动度。

2. 结肠长度和结肠黏膜损伤指数(CMDI)：结肠长度反映慢性炎症和损伤修复的间接指标，测量肛门至盲肠根部的长度为结肠长度，单位cm。CMDI为大体标本肉眼损伤评价指标，评分标准：无损伤为0；轻度充血，水肿，表面光滑，无糜烂或溃疡为1分；充血水肿，黏膜粗糙呈颗粒状，有糜烂或肠粘连为2分；高度充血水肿，黏膜表面有坏死及溃疡形成，溃疡最大纵径小于1．0 cm，肠壁增厚或表面有坏死及炎症为3分；在3分基础上溃疡最大纵径大于1．0 cm或全肠壁坏死为4分

3. 组织学损伤评分

取病变最明显处结肠段1 cm，4％多聚甲醛溶液固定，然后将组织常规脱水，石蜡包埋，切片（厚度为4μm），HE染色。经HE染色观察，模型组病变结肠水肿，肠壁明显增厚。黏膜面有弥漫性出血点、红斑和溃疡。镜下可见结肠黏膜糜烂、溃疡、隐窝脓肿、杯状细胞消失，固有层有中性粒细胞、淋巴细胞浸润。正常组大鼠结肠黏膜完整，绒毛排列整齐，未见坏死、脱落。

表1 DAI评分表，DAI>0.5就代表疾病发生

表2 CMDI指数表，模型组CMDI指数低于对照组

图1 结肠大体图 模型组结肠的长度短于正常组，结肠缩短变宽、水肿增厚、充血出血及溃疡