尼氏染色
尼氏体(Nissl body)是胞质内的一种嗜碱性物质,广泛见于各种神经元,但其形状大小和数量各有差异。尼氏体主要由平行排列的粗面内质网和多聚核糖体组成。尼氏体的主要功能是合成蛋白质,作为神经活动时所需,如细胞中的某些成分的更新以及产生神经递质有关的蛋白质和酶类。轴突端的蛋白质大都来自胞体的尼氏体。神经元在兴奋传导过程中,不断消耗某些蛋白质,尼氏体可合成新的蛋白质以补充这种消耗。
尼氏体染色液可用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体染色,染色后呈蓝紫色,常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。尼氏小体大而数量多,说明神经细胞合成蛋白质的功能较强,相反在神经细胞受到损伤时,尼氏小体的数量会减少甚至消失。
1. 尼氏染色的应用
(1)观察神经元内的细胞结构;
(2)通过尼氏染色后对尼氏体的观察来了解神经元的损伤;
(3)检验实验动物脑区损毁或埋藏电极的位置
2. 尼氏染色操作步骤
(1)样品处理
①石蜡切片
二甲苯中脱蜡5-10分钟,共3次。 无水乙醇5分钟, 90%乙醇2分钟, 70%乙醇2分钟,蒸馏水2分钟。
②冰冻切片
蒸馏水2分钟。
③培养细胞
用4%多聚甲醛固定10分钟以上, 蒸馏水洗涤2分钟,换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。
(2)染色
尼氏(Nissl)染色液染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间,染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀)。 蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。
(3)脱水、透明、封片
95%乙醇脱水2分钟,换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。 二甲苯透明5分钟, 换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟。 用中性树胶或其它封片剂封片。
(4)镜检
显微镜下观察,细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。
(5)其它染色
如果进行免疫荧光染色,或进行 Hoechst 等荧光染料的染色,在 Nissl 染色液染色后: 70%乙醇洗涤2次,每次2分钟。PBS 或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光 染料染色的溶液浸泡5分钟。然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。
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