染色体免疫共沉淀测序
概念和原理
ChIP-Seq:用于在全基因组范围中研究DNA结合蛋白质(相互反应)、组蛋白修饰(表观遗传标记)和核小体的技术,研究这三个主题可有助于了解基因之间的相互调控以及染色体的功能结构。
ChIP-Seq实验原理:在生理状态下,把细胞内的DNA与蛋白质交联( Crosslink),然后裂解细胞,分离染色体,通过超声或酶处理将染色质随机切割,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白质相结台的DNA片段沉淀下来,再通过反交联(Raversecrosslink),释放结合蛋白质的DNA片段,最后测序获得DHIA片段的序列(如图所示)。
科研和临床应用
由于ChIP-Seq的数据是DNA测序的结果,为研究者提供了进一步深度挖掘生物信息的资源,研究者可以在以下几方面展开研究:
l 判断DNA链的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰;
l 检测RNA polymerase l J及其它反式因子在基因组上结合位点的精确定位;
l 研究组蛋白其价修饰与基因表达的关系;
l CTCF转录因子研究。
标本采集、保存、运输
l 对于DNA样品,如需长途运输,可将检测合格的样品编号密封,注意切匆泄漏,冷冻运输。
l 对于组织和细胞样品,先用甲醛交联,然后液氮速冻,-80℃保存,冷冻运输。
客户须知
l 细胞:每个ChIP反应提供≥5 x107个细胞:
l 组织:≥100 mg:
l DNA样品:最低浓度≥10 ng/Ⅲ,OD260/280值应在1 8 2 0之间。每个样品总量不少于200 ng,长度分布200-500 bp,溶解在ddHz0中。
报告形式
l 原始数据报告(Fasta-Q格式):包含所有测序序列的序列信息,碱基读取质量评估;
l 基本数据分析报告(Excel表格):包含有效序列的序列信息,与参考基因组比对后的注释信息等;
高级数据分析(应客户要求定制):如富集区域( enriched region)鉴定,分析两样本间有寓集水平差异的区域并注释,预测转录因子结合区的motif,结合表达谱分析其对基因的表达调控等。
相关技术资料
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