质粒构建
质粒构建
CRISPR/Cas9 all in one质粒是YSY BIOTCH推出的在进行CRISPR/Cas9基因组编辑时普遍使用的工具质粒。其搭配合理的递送机制可以运用到各种真核生物中稳定且高效的表达。
质粒主要由三类表达元件组成。分别是Cas9表达元件、CRISPR表达元件以及抗性或荧光筛选标记。
表达原件组成及搭配图见下表
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Cas9启动子 |
Cas9类型 |
sgRNA启动子 |
CRISPR |
抗性筛选标记 |
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T7 |
SpCas9 |
U6 |
根据客户要求定制 |
eGFP |
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eSpCas9 |
eCFP |
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CMV |
eSaCas9 |
eYFP |
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dCas9 |
mCherry |
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dCas9-Eve |
U3 |
Neo |
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2x35S |
dCas9-KRAB |
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dCas9-VP64 |
Puromycin |
注：根据应用物种类型（动物或植物）来选择启动子类型；
根据具体编辑工作要求以及位点特定要求选择不同Cas9（推荐SpCas9）
根据可使用的筛选工具来选择筛选标记（如有荧光显微镜或流式分选仪可选用荧光标记，如没有也可以选用药物抗性，我们也有双筛选标记但不建议使用，因为质粒过大在递送时会存在困难）
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