B6-hCTLA4

品系名称：B6/JGpt-Ctla4 ^{em1Cin(hCTLA4)}/Gpt

品系类型：Knock in

品系编号：T003362

背景：C57BL/6JGpt

品系描述

细胞毒T淋巴细胞抗原4（CTLA-4）又名CD152， 是由Ctla-4基因编码的一种白细胞分化抗原，属于免疫球蛋白超家族。T细胞中主要表达CTLA-4的细胞为Treg，一类可以负向调节细胞免疫的T细胞。目前认为CTLA-4的功能为控制调节性T细胞（Treg）定位。CTLA-4的胞外区能够与CD28竞争性的结合APC表面的B7分子配体（CD80/CD86），产生抑制信号，抑制T细胞激活，使肿瘤细胞免受T淋巴细胞攻击。因此阻断CTLA-4的免疫效应可刺激免疫细胞大量增殖，从而诱导或增强抗肿瘤免疫反应。将小鼠的Ctla-4基因进行人源化后，小鼠不表达鼠的Ctla-4蛋白，表达人的CTLA-4蛋白，经改造后的人源化小鼠接种鼠源肿瘤后可用于人源抗体/药物的药效及毒理学评价。

Ctla-4基因编码膜蛋白，其胞外区为受体/配体结合区，胞内区则负责信号传导。集萃药康利用基因编辑技术将人的CTLA-4胞外区基因替换小鼠对应基因位点，而胞内区则保留完整的鼠源序列。

获得的B6-hCTLA4人源化品系能成功表达hCTLA-4蛋白，且纯合子小鼠中hCTLA-4的表达与野生型中mCTLA-4的表达丰度一致。CTLA-4人源化模型是人类CTLA-4抑制剂药效评价及安全性评价的理想动物模型。

品系策略

应用领域

1.人类CTLA4抑制剂药效评价（如：筛选人类CTLA4中和性抗体或抑制人类CTLA4活性的小分子药物）；

2.抗人CTLA4抗体安全性评价；

3.免疫系统相关研究。

验证数据

1.CTLA4表达检测

图1  B6-hCTLA4小鼠脾脏中T细胞上hCTLA4表达检测。 

鼠CD3 抗体刺激后，在野生型小鼠脾脏中检测到 mCTLA4表达；刺激后的hCTLA4 人源化杂合子小鼠共表达鼠源和人源CTLA4蛋白；hCTLA4 人源化纯合子小鼠表达人源CTLA4蛋白，与野生型小鼠mCTLA4 蛋白表达水平接近。

2.T/B/NK细胞比例检测

图2  B6-hCTLA4小鼠T/B/NK细胞比例检测。

野生型小鼠与B6-hCTLA4纯合子小鼠在外周血及脾脏中的T/B/NK细胞变化趋势接近。

3.B6-hCTLA4抗体药效验证

在B6-hCTLA4小鼠模型皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人CTLA4抗体YERVOY^®（Ipilimumab)的肿瘤抑制药效

图3 利用B6-hCTLA4小鼠进行抗人CTLA4抗体药效验证实验。

将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B6-hCTLA4纯合小鼠皮下，待肿瘤平均体积约100mm³时将动物入组至对照组和治疗组（对照组n=5,治疗组n=7）。结果显示：抗人CTLA4抗体Yervoy对肿瘤生长有非常明显的抑制作用（TGI=100%）。数据使用Mean±SEM表示。结果证明： B6-hCTLA4小鼠是评估人CTLA4抗体体内药效的有力工具。

4.CTLA4抗体剂量药效验证

在B6-hCTLA4小鼠模型皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人CTLA4抗体YERVOY

图4 利用B6-hCTLA4小鼠进行抗人CTLA4抗体药效验证实验。

将小鼠结肠癌细胞CT26移植到B6-hCTLA4纯合小鼠皮下，待肿瘤平均体积约100mm³时将动物入组至对照组(G1，N=6)和治疗组(G2-G3,N=6; G4-G5,N=5)。结果显示：抗人CTLA4抗体Yervoy在高剂量治疗组(G3:TGI=85%;G4:TGI=99%;G5:TGI=99%)，对肿瘤生长有非常明显的抑制作用；而在低剂量治疗组具有部分的抗肿瘤药效（TGI=22%）。数据使用Mean±SEM表示。结果证明：B6-hCTLA4小鼠是评估人CTLA4抗体体内药效的有力工具。